[00985521]真菌毒肽基因资源开发利用研究

该项目收集到180种毒蘑菇(大型有毒真菌)，建立了其资源分布、生态信息库和真菌的孢子库；建立了20种肿瘤细胞水平(含血液病和实体瘤)的快速筛选模型；建立了3 种小鼠肿瘤(腹水瘤和实体瘤)模型 ，即肉瘤S-180、肝癌Heps、艾氏EAC细胞瘤。形成了以细胞水平药物筛选模型为初筛，以整体动物药物筛选模型为复筛的真菌抗肿瘤药物筛选平台；建立了以立枯丝核菌Rhizoctonia solani，灰葡萄孢Botrytis cinerea，尖孢镰孢菌Fusarium oxysporium f.sp等作物病源真菌为代表引起的水稻纹枯病、果蔬灰霉病、作物萎焉、果腐、棉花枯萎病等3种病害的农药筛选模型。共筛选有毒蘑菇资源180种，提取物样品5640份，获得了抗病效果较好的提取物样品10份。系统提取并筛选分析了180种毒蘑菇提取物样品7200份的抗肿瘤效果，发现了13种真菌具有体外抗肿瘤活性，获得其中三个单体化合物，均已解析出化学结构。1.有毒菌蕈的采集分类与数据库建立：两年内，在云南省昆明(官渡区、西山区、嵩明县、宜良县、寻甸县)、楚雄(楚雄市、南华县、禄丰县)、丽江(古城区、玉龙县)、中甸(香格里拉县、维西县)、曲靖(麒麟区)、大理(大理市、鹤庆县、祥云县、弥渡县)，浙江省天目山等地进行了有毒大型真菌的资源调查、样品采集。采集大型真菌样品10000余份，鉴定出有毒样品8000余份，共180个种。通过提取、筛选、及体外细胞实验，共发现13种毒蘑菇粗提液具有显著的体外抗肿瘤活性编号为(1)M0006，(2)M0053，(3)M0041，(4)M0043，(5)M0057，(6)M0058，(7)M0077，(8)M0153，(9)M0157，(10)M0160，(11)M0162，(12)M0164，(13)M0165。2.有毒毒菌蕈抗农作物真菌活性筛选：建立了以立枯丝核菌Rhizoctonia solani，灰葡萄孢Botrytis cinerea，尖孢镰孢菌Fusarium oxysporium f.sp等农作物病源真菌为代表引起的水稻纹枯病、果蔬灰霉病、作物萎焉、果腐、棉花枯萎病等3种真菌病害的农药筛选模型。共筛选有毒蘑菇资源180种，提取物样品5640份，获得了抗病效果较好的提取物样品10多份，其中M030020-2对造成水稻纹枯病的Rhizoctonia solani，引起多种蔬菜瓜果灰霉病的Botrytis cinerea， Fusarium oxysporium f.sp等三种农作物病源真菌的抑制效果尤为突出，3.先导化合物的提取分离鉴定：提取和纯化的M0006，浓缩后得白色针状晶体，用高分辨质谱仪、核磁共振仪等对所得晶体进行结构鉴定，结果是为松胞菌素D，无色针晶，分子式为C30H37NO7。M0006具有直接杀死肿瘤细胞的效应，是研制体内治疗恶性肿瘤药物的一个很好的先导化合物。提取和纯化的M0053，得白色晶体10.5mg，经核磁共振仪、X-晶体衍射仪分析，结果为轮枝孢菌素A，无色晶体，分子式为C30H28N6O6S4。M0053具有强烈抑制肿瘤细胞增殖的作用，具有进一步研制新抗恶性肿瘤药物的前体价值。提取和纯化的M0153，解析得Clitocine是一种白色无定型粉末，分子式为C9H13N5O6。该品作为腺苷类似物与腺苷激酶竞争性结合，能有效抑制腺苷磷酸化作用，使细胞内单磷酸的形成过程受阻，进而通过一系列生理生化过程表现出细胞毒效应。试验表明Clitocine对人宫颈癌、腮腺癌等离体肿瘤细胞有较温和的细胞毒活性，是一种在临床肿瘤治疗中很有希望的化疗候选药物。