[00975672]人细胞周期蛋白D1在大肠杆菌BL21中的表达及纯化
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将人细胞周期蛋白D1全长cDNA克隆入原核表达载体pET-28c(+)中，经酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3)后获得表达菌株。该菌株经IPTG诱导高效表达出带有组氨酸标签的以包涵体形式存在的融合蛋白，表达量占菌体总蛋白的23%。包涵体经洗涤和溶解，在变性条件下利用Ni^(2+)螯合柱纯化、尿素梯度复性后，得到纯度达98%以上的纯化蛋白。SDS-PAGE显示纯化蛋白的分子量约为43000，Western-blot分析表明，在相应分子量处有一特异性条带，说明成功表达和纯化重组人细胞周期蛋白D1。