[00951131]GST-HAI-1融合蛋白的表达及抗人HAI-1单克隆抗体的制备
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技术详细介绍
制备抗人肝细胞生长因子激活物抑制因子(HAI-1)单克隆抗体，为对HAI-1进行进一步的研究打下基础。将人HAI-1 cDNA分段克隆，构建GST-HAI-1融合蛋白原核表达载体，转化大肠杆菌后加IPTG诱导融合蛋白表达，经制备型SDS-PAGE法分离表达的GST-HAI-1融合蛋白，通过割胶、电洗脱回收融合蛋白，并以此为抗原免疫BALB/c小鼠，应用细胞融合技术制备产生抗人HAI-1单克隆抗体的杂交瘤，以ELISA、Western blot和免疫组织化学染色进行鉴定。最终获得抗人HAI-1单克隆抗体杂交瘤细胞株ZMC6，产生的单克隆抗体可特异性地与表达的GST-HAI-1融合蛋白反应，并可识别大肠组织中的膜型及脱落型HAI-1蛋白。该单克隆抗体的制备成功，为深入研究HAI-1的功能提供了有力工具。