[00944769]青鱼分子生物学研究平台的建立

青鱼为中国“四大家鱼”之一，是重要的淡水养殖鱼类。国内外有关青鱼基础研究的报道很少，青鱼生长、抗病方面的分子机制研究更是一片空白。建立青鱼分子生物学研究平台并籍此系统研究青鱼生长、免疫抗病机制对于青鱼养殖业的持续、健康发展具有重要的战略意义。 该项目自2005年以来，依托湖南师范大学省部共建淡水鱼类发育生物学国家重点实验室，利用国家自然科学基金面上项目、教育部“新世纪优秀人才支持计划”项目、湖南省杰出青年基金等资源，逐步建立了青鱼分子生物学研究平台。在国际上率先对青鱼天然免疫展开了系列研究，首次阐明了青鱼RLR信号通道在宿主抗草鱼呼肠孤病毒(GCRV)天然免疫反应中具有极其重要的作用；克隆并获得了青鱼β-actin及生长激素基因，并成功将青鱼基因转入四倍体鲫鲤中，获得了转青鱼生激素基因的四倍体鱼，为研究青鱼和异源四倍体鲫鲤的分子生物学提供了重要材料。项目相关研究成果在Fish and Shellfish Immunology、中国科学等国内外学术期刊上发表论文10篇，其中2015-2017年发表SCI-区论文5篇，总计引用次数55次，总他引次数15次，单篇最大他引次数8次。该项目主要创新性成果如下： (I)在国际上率先建立青鱼分子病毒与宿主免疫研究平台，系统研究RLR信号通道在青鱼抗病毒天然免疫中的功能机制。 鱼类主要依靠天然免疫抵抗病原微生物的侵染，由类RIG-I受体(RIG-I-like receptor/RLR)介导的信号通路在鱼类天然免疫中起着极其重要的作用。1)该项目首次克隆并鉴定了青鱼RLR家族关键成员LGP2，阐明LGP2在青鱼抗GCRV天然免疫反应中起重要作用。2)首次克隆了青鱼RLR信号通路中重要的接头蛋白MAVS，并发现在EPC细胞中过表达MAVS能够显著上调EPC干扰素(IFN)的分泌且显著增强EPC抗GCRV的能力。3)首次在鱼类中克隆和鉴定了IKKcε并证明了青鱼IKKcε上调宿主细胞IFN分泌和抗病毒能力。4)首次克隆了青鱼RLR信号通道下游因子IFNa以及干扰素诱导基因Mx1；鉴定出IFNa具有糖基化修饰，然而糖基化修饰并不影响其分泌性和抗病毒能力，并发现Mx1作为“效应因子”，具有极强的抗GCRV能力。 (II)在国际上率先开震源于青鱼基因的转基因实验。 构建了青鱼β-actin基因和青鱼生长激素(GH)基因精确拼接的“全鱼”基因pbcAbcGHc，通过显微注射和对照养殖得到了具有明显生长优势的P0代转青鱼GH基因异源四倍体鲫鲤。为进一步筛选和建立转青鱼GH基因异源四倍体鲫鲤纯系奠定了坚实的基础，同时也为研究青鱼和异源四倍体鲫鲤的分子生物学提供了材料。