[00927030]志贺毒素靶向抗癌重组蛋白的研究

采用基因工程技术构建、表达和初步纯化两种重组志贺毒素融合蛋白，通过细胞毒性试验和XTT法检测，证明重组志贺毒素对HeLa细胞有杀伤作用，为使其成为新的导向治疗宫颈癌的药物打下基础。美国Ahme曾构建、纯化了Stx1A-hCD4重组毒素，选择性的杀死感染了HIV-1的细胞，国内尚未见有重组质贺毒素的制备。该试验之所以选用Stx2A作为重组毒素的细胞毒区，是因为Stx2较Stx1毒性强400倍，且Stx2A是志贺毒素的一个亚基，没有B亚单位不能与Stx受体结合，因此不能破坏表面有Stx受体的细胞，即避免了正常细胞受杀伤，同时又较Stx1增加了对细胞的杀伤作用。LHRH是下丘脑分泌的十肽类激素，DNA结构为CAGCACTGGTCCTACGGTCTGCGTCCGGGT，蛋白质结构为Pyro-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2，LHRH分子量小适合于重组毒素的结构，因蛋白分子量小、且保持原型的细胞毒性强。正常情况下，LHRH受体主要存在脑垂体的细胞膜上，经研究表明，癌细胞的细胞膜表面受体异化，形成大量的LHRH受体，且以激素反应性恶性肿瘤更明显，妇科恶性肿瘤如乳腺癌、卵巢癌、子宫癌等均属性激素反应性肿瘤。所以应用LHRH作为重组志贺毒素的靶向元件治疗妇科恶性肿瘤非常合理。因重组志贺毒素分子量较大，不易通过血脑屏障，不能与脑垂体的LHRH受体结合，对脑垂体无损伤，为导向药物的制备开发提供理论依据。且宫颈癌局部用药方便确切，而且还可以通过介入技术使药物局限于病变组织，减少对正常组织的副作用。