[00926375]基于绿色荧光蛋白的均相荧光共振免疫检测法的建立

为了探索基于绿色荧光蛋白的均相荧光共振免疫检测法的可行性，该课题采用基因工程抗体、荧光共振能量转移等技术，开展了基因工程抗体表达、新型均相荧光共振免疫检测技术的建立及评估等研究，并取得了重要进展。该课题于2001年正式启动，于2004年获得滚动支持，并于2005年11月通过了科技部组织的课题验收。该课题将识别乙型肝炎病毒(HBV)preSl抗原的中和单抗MA18/7的重链可变区的N端与绿色荧光蛋白(GFP)进行融合表达，得到融合蛋白Gall；表达MA18/7的轻链可变区，纯化后与荧光淬灭剂QSY35偶联，得到标记抗体QL。分别以GaH和QL作为均相荧光共振免疫检测体系的能量供体和能量受体，建立了检测preSl抗原的均相荧光共振免疫检测法(hFRIA)。与两种商业化试剂盒(ELISA)进行平行比较：10份HBVDNA阳性血清中，hFRIA检出7份，两种ELISA只能检出2份和3份；46份HBVDNA阴性血清中，hFRIA出现4份假阳性，两种ELISA分别出现2份和1份假阳性；ELISA试剂与HBVDNA检测的一致率仅为82.1％和83.9％，而hFRIA与HBVDNA检测的一致率为87.5％；hFRIA全部检测时间仅需30min，而ELISA方法需要2h。该方法可以同时检测大量样品，与现有微孔板操作体系兼容性好，易于实现准确定量及实验体系的标准化和自动化，该原理可推广至各种抗原抗体检测中，具有广泛的应用前景。该课题国内发表论著4篇；申请发明专利3项(其中国外1项)。