[00009675]家蚕杆状病毒系统高效表达福寿螺纤维素酶基因的研究
交易价格：
面议
所属行业：
其他食品饮料
类型：
非专利
技术成熟度：
正在研发
交易方式：
技术转让
联系人：
程正昌/高静昕
进入空间
所在地：浙江杭州市
- 服务承诺
- 产权明晰
-
资料保密
对所交付的所有资料进行保密
- 如实描述
技术详细介绍
技术投资分析：
本项目属原始创新项目，所用的纤维素酶受专利保护，具有自主知识产权。
根据EGX基因序列合成一对含有酶切位点和起始密码子或终止密码子的特异性引物，在提供含有EGX基因的质粒中经PCR扩增两端含特异酶切位点的全长EGX基因。PCR产物经纯化、双酶切后，低熔点胶回收，与经相同酶切并回收的pBacPAK8载体连接、转化后挑取阳性克隆，酶切、PCR扩增鉴定插入片段大小，即为pBacPAK-EGX转移载体。
纯化的pBacPAK-EGX质粒DNA与线性化的野生型Bm-BacPAK6 DNA通过脂质体共转染家蚕细胞，空斑纯化和PCR鉴定后，获得高水平表达EGX的纯化重组病毒BacPAK-EGX。用重组病毒感染培养的单层家蚕细胞，取样后用ELISA法测定表达量，测定酶活性。
对家蚕高龄幼虫和蛹分别接种重组病毒BacPAK-EGX，一定时间后收集家蚕血淋巴，粗提后进行SDS-PAGE电泳和免疫印迹等分析以及酶活性测定等；同时验证蚕体内表达的EGX与福寿螺天然EGX在酶的分子特征和酶反应相关指标等方面的异同。
从家蚕品种、病毒接种量、收获时间及环境因子等研究家蚕杆状病毒表达系统高效表达EGX基因的最优化条件；利用DEAE-纤维素、分子筛、Mono-Q和亲和层析及高效液相色谱HPLC等技术研究EGX蛋白纯化技术，建立一套行之有效的蛋白质纯化技术。
技术的应用领域前景分析：
项目利用家蚕生物反应生产纤维素酶，比用真菌和细菌等微生物生产具有成本更低，产量更高的优势。且易扩大生产规模，极具产业化前景。
效益分析：
该项目可应用于相关蚕类养殖基因工程，具有较大经济效益。
厂房条件建议：
无
备注：
无
技术投资分析：
本项目属原始创新项目，所用的纤维素酶受专利保护，具有自主知识产权。
根据EGX基因序列合成一对含有酶切位点和起始密码子或终止密码子的特异性引物，在提供含有EGX基因的质粒中经PCR扩增两端含特异酶切位点的全长EGX基因。PCR产物经纯化、双酶切后，低熔点胶回收，与经相同酶切并回收的pBacPAK8载体连接、转化后挑取阳性克隆，酶切、PCR扩增鉴定插入片段大小，即为pBacPAK-EGX转移载体。
纯化的pBacPAK-EGX质粒DNA与线性化的野生型Bm-BacPAK6 DNA通过脂质体共转染家蚕细胞，空斑纯化和PCR鉴定后，获得高水平表达EGX的纯化重组病毒BacPAK-EGX。用重组病毒感染培养的单层家蚕细胞，取样后用ELISA法测定表达量，测定酶活性。
对家蚕高龄幼虫和蛹分别接种重组病毒BacPAK-EGX，一定时间后收集家蚕血淋巴，粗提后进行SDS-PAGE电泳和免疫印迹等分析以及酶活性测定等；同时验证蚕体内表达的EGX与福寿螺天然EGX在酶的分子特征和酶反应相关指标等方面的异同。
从家蚕品种、病毒接种量、收获时间及环境因子等研究家蚕杆状病毒表达系统高效表达EGX基因的最优化条件；利用DEAE-纤维素、分子筛、Mono-Q和亲和层析及高效液相色谱HPLC等技术研究EGX蛋白纯化技术，建立一套行之有效的蛋白质纯化技术。
技术的应用领域前景分析：
项目利用家蚕生物反应生产纤维素酶，比用真菌和细菌等微生物生产具有成本更低，产量更高的优势。且易扩大生产规模，极具产业化前景。
效益分析：
该项目可应用于相关蚕类养殖基因工程，具有较大经济效益。
厂房条件建议：
无
备注：
无
