[00864240]基因工程技术表达faeG-fedF融合蛋白生产特异性卵黄抗体添加剂研究

建立了快速准确的检测肠毒素大肠杆菌(ETEC)的PCR方法；调查并确定了K88和F18是湖北省规模化猪场仔猪大肠杆菌腹泻的主要病原菌。保证特异性卵黄抗体的应用更具有针对性、特异性和高效性。以K88和F18的菌毛蛋白亚单位为目标蛋白，利用基因工程技术实现了K88的单一菌毛蛋白FaeG以及K88和F18的双价菌毛融合蛋白faeG-fedF在大肠杆菌中的高效表达；获得了500mg/L以上的目标蛋白，比直接分离提纯菌毛蛋白的方法提高300倍以上。解决了高产高免疫原性的抗原的工业化生产这一技术“瓶颈”。建立了特异性卵黄抗体效价的间接ELISA检测方法，全蛋粉中卵黄抗体的ELISA效价达1:12800以上。研究了制备特异性卵黄抗体的工艺及参数，制备的特异性卵黄抗体粉具有良好的加工和储藏稳定性，为特异性卵黄抗体的产业化提供了技术条件。通过体内外试验，评价和验证了特异性卵黄抗体在预防和控制断奶仔猪腹泻的作用机制与效果；特异性卵黄抗体添加于早期断奶仔猪日粮中，7周龄仔猪体重达15kg以上，保育期料重比1.8:1以下，是一种安全高效的绿色饲料添加剂。该研究成果可应用于饲料添加剂企业和养殖企业生产特异性卵黄抗体；为饲料加工企业生产特异性卵黄抗体全蛋粉提供适宜的工艺参数。