[00821794]携带外源基因的重组减毒李斯特菌构建及其免疫原性

单增李斯特菌作为疫苗载体可以将外源基因或其表达产物呈递给宿主抗原递呈细胞，并诱导相应的免疫反应。该项目以鸡新城疫病毒（NDV)融合蛋白F基因和绿色荧光蛋白基因gfp为模式抗原基因，将其插入李斯特菌毒力基因actA、plcB和hly的信号肽序列之后，成功构建了重组李斯特菌多株。与野生型亲本菌株相比，重组菌对小鼠和鸡胚的毒力（LD50)下降幅度在1～6.5对数之间，其中hly插入突变株对小鼠和鸡胚的毒力分别下降3.7和6.5对数。目的基因NDV-F和gfp在重组菌体外培养后获得了转录或表达。插入突变的重组菌对细胞的黏附力没有影响，但对细胞的侵袭力有所下降，是其对小鼠毒力下降的原因之一。以SPF雏鸡作为实验动物免疫后未检测到针对NDV-F的特异性体液免疫应答，对NDV强毒攻击亦未能提供有效的特异性免疫保护，可能与重组菌在鸡体内存活量和时间以及目的基因在体内表达量低下有关。单增李斯特菌突变株构建体系的建立，为该菌作为疫苗载体的研究、开展其致病机理和天然弱毒株的分子基础研究提供了可能。