技术详细介绍
一种大肠杆菌胞外生产外源蛋白的集成化方法
本发明公开了一种大肠杆菌胞外生产外源蛋白的集成化方法，包括单基因突变的分泌型大肠杆菌的菌株构建、外源蛋白表达的分泌型重组大肠杆菌的菌株构建及分泌型重组大肠杆菌的目标蛋白表达过程。本发明采用大肠杆菌的pal或mrcB等基因突变株为宿主和定位于周质空间的重组蛋白质粒，使得重组蛋白的发酵和胞外分泌同时进行。从而实现降低目标蛋白的胞内降解，提高重组蛋白表达；同时减少重组蛋白的胞内过度积累，而降低包涵体形成；消除细胞破壁工艺，减少热原污染，方便分离纯化；进而达到降低生产成本，提高产品表达及质量的目的。经检测，超过40%的重组蛋白渗漏到培养基中，表达水平为10~30%。