[01807239]高倍表达海藻糖合酶工程菌构建及应用研究

该项目是由山东省科技厅下达的山东省科技发展计划项目;本项目是通过基因克隆手段,从实验室经过多年筛选所得的Pseudomonas putida P06菌种中克隆得到海藻糖合酶基因,成功导入大肠杆菌中高效表达,并进一步导入枯草芽孢杆菌中进行高效表达,表达效果良好,达到工业生产要求。 通过对构建成功的枯草芽孢杆菌之一W800N/pHT01-TreS菌株重组酶特性研究,该酶适用温度范围宽,在35℃～55℃范围内,转化率高,效果好,其pH值范围在6.5～7.5范围内最适,转化中产葡萄糖量少,与报道的相关酶比较,温度耐受性好,葡萄糖产率低。 经过对W800N/pHT01-TreS菌株的发酵培养基优化,研究该菌高压均质破壁后,粗酶转化麦芽糖生成海藻糖的条件,在50～55℃转化效果好,同时避免杂菌的污染;通过1m3发酵罐发酵优化,酶活力单位超过4000U/g（干菌体）,在底物400g/L麦芽糖浓度,pH 6.5～7.0,温度50～55℃下,转化率达85%,实现海藻糖合酶基因工程菌工业化生产,并能充分应用于海藻糖的生产制备中。目前未见用工程菌发酵规模生产海藻糖合酶及用于海藻糖生产报道。