[01727405]联合种植肌成纤维细胞和内皮细胞构建组织工程心脏瓣膜的实验研究

心脏瓣膜病是中国的常见病之一，严重危害着国人健康，瓣膜置换术是外科治疗严重心脏瓣膜疾病的主要方法。临床上应用的人工心脏瓣膜主要有机械瓣和生物瓣两种。机械瓣置换后须终生服用抗凝药，因抗凝不当而造成的出血、血栓形成及栓塞是影响患者长期存活及生活质量的重要因素；生物瓣置换后，尽管无需长期抗凝治疗，但由于瓣膜缺乏生命活力，术后易发生生物瓣退行性变、钙化而导致瓣膜衰败，部分患者需二次手术置换。此外，这些人工心脏瓣膜均不具有生长能力，尤其不适用于儿童或年轻心脏瓣膜病患者。组织工程心脏瓣膜(TissueEngineeringHeartValve，TEHV)被认为是根本解决心脏瓣膜置换术后并发症的革命性产品。TEHV是按照组织工程学方法，将体外培养、扩增的自体活细胞种植在可降解材料构建的瓣膜支架上，使自体活细胞在支架上生长并产生细胞外基质，逐渐形成具有活性的瓣膜组织，培养出一种无免疫源性、无需抗凝、耐久性强的新一代生物心脏瓣膜。同时，由于它具有生物活性，可在体内生长、发育，并可抵御感染入侵，尤其适用于儿童或感染性心内膜炎患者。组织工程心脏瓣膜的研究大体包括：种子细胞的来源、瓣膜支架的选材和制备、种子细胞在支架上的种植与TEHV的构建三个方面的内容。在细胞种植的方法、条件、培养环境等方面尚未找到理想的办法，如何将种子细胞简便、牢固地种植于瓣膜支架材料上已成为目前亟待解决的关键问题之一。该实验以骨髓间充质干细胞(BMSCs)作为种子细胞分化为肌成纤维细胞和内皮细胞。猪主动脉瓣膜经胰蛋白酶、脱氧胆酸和核酸酶处理后作为瓣膜支架。细胞种植分3组同时培养做对比研究：联合种植肌成纤维细胞和内皮细胞作为实验组，共培养4周，单独种植其中一种细胞作为对照组，各培养2周。取样分别行HE染色、免疫组化染色、扫描电镜观察等瓣膜进行鉴定。结果发现：联合种植肌成纤维细胞和内皮细胞是构建TEHV一种先进的、有效的细胞种植方法。该研究具有新颖性、先进性，创新点：1.探索出一种具有外科实用价值的细胞移植方法构建组织工程心脏瓣膜。2.为提高干细胞移植治疗疗效的基础研究构建试验平台。