[01656077]HER2/neu基因沉默的最佳RNAi序列筛选及其抗肿瘤效应的实验研究
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技术详细介绍
最佳her2/neuRNA干扰靶序列的筛选：1)分别构建pU6-her2(1)-knockdown、pU6-her2(2)-knockdown、pU6-her2(3)-knockdown、pU6-her2(4)-knockdown、pU6-her2(5)-knockdown表达载体。2)将构建的表达载体分别转染入SK-BR-3细胞中，采用RT－PCR法、实时定量PCR法检测SK-BR-3细胞中her2/neu基因的表达。3)western-blot方法分别检测SK-BR-3细胞中her2/neu蛋白的表达水平，筛选出最佳的her2/neuRNA干扰靶序列。慢病毒稳定转染体系的建立：1)将含有最佳的her2/neuRNA干扰靶序列的表达载体转染入293细胞中，制备her2-knockdown慢病毒。2)浓缩并测定慢病毒的滴度。3)在基因水平和蛋白水平上对慢病毒感染SK-BR-3细胞后的稳定转染株的筛选及鉴定。4)将稳定转染的SK-BR-3细胞株皮下注射至裸鼠体内，观察RNAi效应对肿瘤细胞成瘤性的影响。