[01646156]提高生长因子类功能蛋白表达量及稳定性的新技术及应用

主要技术内容：该项目组围绕提高生长因子类功能蛋白表达水平和稳定性的关键工程技术开展了创新而深入的研究，在国际上率先开发了肝素亲和层析和疏水层析固相定点修饰技术，开发了一系列提高功能蛋白药用价值的新型制剂工艺，相关技术成功应用到多个生长因子功能蛋白中并已获得了两项新药临床批文，相关技术孵化的皮肤护理项目也已创造了显著的经济社会效益，技术水平达到了国内领先水平。提高生长因子类蛋白表达量的关键技术研究：针对生长因子类蛋白普遍存在的可溶性表达量低、易形成包涵体等缺陷以及FGFs内分泌亚家族重要成员FGF21mRNA因在翻译起始阶段形成茎环结构而降低可溶性表达量的问题，创造性的利用分子伴侣SUMO作为表达FGFs的融合标签建立了该类蛋白的高效可溶性表达体系提高生长因子类蛋白稳定性的关键技术研究：针对FGFs家族具有重要临床价值的功能蛋白如FGF1/2/7/10/21和FGF23C-Tail等普遍存在稳定性差、半衰期短的缺陷，率先开展了针对FGF蛋白结构改造和修饰研究，发明建立了多个固相特异性修饰体系，成功克服了传统液相修饰影响蛋白活性、易引起非特异性随机修饰进而造成纯化工艺难的缺陷新型制剂开发及应用：结合FGFs结构和生物学特征，开展了大量有关FGFs量效关系、释药体系的研究，发明了新型FGFs制剂工艺，相继开发了FGF10外用冻干粉制剂（临床III期）、FGF7冻干粉注射制剂（临床II期）、FGF10滴眼液、FGF1凝胶剂。上述制剂采用随机、双盲对照的多中心临床试验，已累计观察临床病例600多例，涉及大面积烧伤和糖尿病难愈性溃疡（FGF10外用冻干粉制剂）、肿瘤化疗引起的口腔黏膜溃疡（FGF7冻干粉注射制剂）等。很大程度上拓展了FGFs临床应用范围、提升了其临床应用价值。发明专利及学术论文：申请发明专利17项，获授权8项；发表SCI论文76篇。技术指标：重组蛋白FGF可溶性表达率占菌体总蛋白的20-30%，产量>120mg/L，纯度>99%，DNA残留量<100pg/dose；蛋白PEG修饰率均超过80%，修饰产物活性与修饰前蛋白一致，体内半衰期均提高8倍以上。应用推广及效益情况：FGF1凝胶剂和FGF10外用冻干粉制剂由安徽鑫华坤分别投入1000万元和5500万元与该项目组共同开展新药申报和产业化；FGF7冻干粉注射制剂转让给成都芝田开展新药申报和产业化；FGF10滴眼液由该项目组与珠海亿胜、浙江格鲁斯特联合开展临床研究；以FGF及修饰产物为原料的医学美容产品也已创造显著的经济和社会效益。