[01592472]滚环扩增高灵敏度化学发光检测DNA和蛋白质
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技术详细介绍
该项目建立了滚环扩增化学发光和均相荧光染料高灵敏度分析检测DNA、RNA和蛋白质的新方法。提出应用Apyrase酶降解扩增反应溶液中剩余的dNTPs，有效降低了化学发光检测背景，实现了DNA的均相无标记高灵敏度检测，为核酸的高通量化学发光成像分析奠定了重要基础；提出在RCA反应中仅加入一条反向引物，使其引发支化滚环扩增反应，进一步提高了DNA检测的灵敏度。研究发现连接酶T4RNAligase2在特定条件下可实现以RNA为模板高效地连接DNA环式探针，结合荧光染料均相检测，实现了miRNA的特异、高灵敏度分析。方法对于研究miRNA与疾病的相关性以及在RNA水平上的疾病早期诊断具有重要意义。课题所建立的简便、高灵敏度的RCA扩增化学发光和荧光检测新方法，可为生命科学的研究提供核酸和蛋白质定量分析的新方法，为DNA、miRNA和蛋白质高通量芯片检测和化学发光成像分析提供了一个高灵敏度的技术平台，为在基因水平上疾病的早期诊断提供了新的检测技术。