[01570726]铜对仔猪关节软骨细胞TGF-βmRNA基因表达的影响
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技术详细介绍
分离、培养仔猪关节软骨细胞，从中提取总RNA、用RT-PCR法扩增出TGF-β的cDNA、与pMD18-T载体相连、转化JM109大肠杆菌、提取质粒、鉴定所扩增片断为目的片断后，培养仔猪关节软骨细胞。并在培养液中添加不同水平的铜，分别在0、12、24、48h培养结束时，收集细胞，提取细胞总RNA。采用RT-PCR法扩增出TGF-β的cDNA，以β-actin为内参，用凝胶分析系统对扩增出的cDNA进行扫描分析，以TGF-β的cDNA的光密度值与β-actin的cDNA的光密度值之比作为TGF-βmRNA基因表达的相对水平。结果表明：细胞培养液中添加不同水平的铜能促进软骨细胞中TGF-βmRNA基因表达，其中以31.2μmol／L效果最佳。