[01535779]肿瘤靶向治疗相关研究

癌症目前仍是威胁人类生命健康的重要疾病之一，随着分子生物学和基因工程的发展，人们在不断探索癌症分子生物学发病机制的同时，意识到靶向治疗会成为最有前景和最活跃的领域。靶向治疗中分子靶点的确定及相关药物的基础研究是临床应用的基础和前提。本课题分别探讨了采用基因工程合成的肺癌靶向治疗药物131I-chTNT联合外照射后对荷瘤小鼠的生长抑制作用；初步探讨了MK蛋白作为膀胱癌的分子标志物和靶向治疗靶点的可能以及洛伐他汀对雌激素受体阴性的乳腺癌细胞的生长抑制作用。为临床肿瘤的综合治疗提供了新的思路和理论基础。一、应用领域、技术原理和性能指标1、外照射联合碘[131I]标记的肿瘤细胞核人鼠嵌合单抗对C57BL/6小鼠Lewis瘤影响的实验研究目的：研究外照射联合不同途径注射基因工程合成碘[131I]标记的肿瘤细胞核人鼠嵌合单抗（131I-chTNT）对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响并观察131I-chTNT在小鼠体内的分布和显像。方法：建立C57BL/6近交系小鼠Lewis瘤模型，当接种于右后肢的肿瘤直径达指定大小时随机分组进行实验。体内分布和活体显像实验分为两组：①单药组：静脉或瘤内给药；②联合组：外照射15Gy 24小时后再以不同途径给药。分别于给药后不同时间测量肿瘤组织及感兴趣器官的放射性，并观察活体显像情况。荷瘤小鼠肿瘤生长效应实验分为四组：①空白对照组；②单药组：静脉或瘤内给药；③照射组：外照射15Gy；④联合组：外照射15Gy 24小时后再以不同途径给药。观察指标为肿瘤生长延迟时间。结果：（1）外照射联合尾静脉注射131I-chTNT荷瘤小鼠体内分布实验中单药组和联合组肿瘤组织的放射性在给药24小时最高，联合组高于单药组，两组间差异有统计学意义（P=0.018），直至72小时、120小时联合组肿瘤组织放射性仍高于单药组，P值分别为0.041、0.024。两组中正常组织的放射性差异无统计学意义（P＞0.05）。活体核素显像中两组均在给药3天时肿瘤区放射性浓聚最集中，持续至7天仍可见肿瘤影像。联合组肿瘤区比单药组的浓聚强且持续时间长。荷瘤小鼠肿瘤生长效应实验表明：单药组、外照射组、联合组的绝对延迟时间分别为(3.1±1.75)天、(9.1±1.86)天和(13.1±2.6)天，标准化延迟时间为10天，131I-chTNT对放射的增益因子为1.08；（2）外照射联合瘤内注射碘131I-chTNT的荷瘤小鼠体内分布实验中单药组和联合组肿瘤组织的放射性均在给药24小时最高，联合组高于单药组，两组间差异有统计学意义（P=0.023），直至72小时联合组肿瘤组织放射性仍高于单药组（P=0.038）。两组中正常组织的放射性差异无统计学意义（P＞0.05）。活体核素显像中两组均在给药1天时肿瘤区浓聚最高，至7天仍可见肿瘤影像。联合组比单药组肿瘤区放射性浓聚强而且持续时间长。荷瘤小鼠肿瘤生长效应实验表明：单药组、外照射组、联合组的的绝对延迟时间分别为(3.3±1.75) 天、(6.0±2.02) 天和(9.5±1.93)天，标准化延迟时间为6.2天，131I-chTNT对放射的增益因子为1.03。结论：外照射联合静脉和瘤内注射131I-chTNT后可促进131I-chTNT在荷瘤小鼠体内肿瘤区的浓聚，但不增加对正常组织的影响。二者联合应用时131I-chTNT可提高外照射对荷瘤小鼠的放射效应。2、膀胱移行细胞癌中MK蛋白表达与其对应的临床病理特征及预后的关系目的：研究中期因子（midkine，MK）在膀胱移行细胞癌组织中的表达，探讨其与膀胱癌对应的临床病理特征及与术后患者预后的关系，探讨该因子成为膀胱癌分子标志物、预后分析指标及靶向治疗靶点的可能性。 方法：采用SP免疫组化染色法检测50例手术切除的人膀胱移行细胞癌组织和10例正常膀胱粘膜中MK蛋白的表达，分析MK蛋白在膀胱移行细胞癌组织中的表达与其临床对应的各项病理参数的关系，对其中40例有随访资料者的MK蛋白表达与预后的关系进行统计学分析。结果：MK蛋白主要定位于肿瘤细胞的细胞质和细胞膜中。在人膀胱移行细胞癌组织中MK蛋白的表达率为90﹪(45/50)，在正常膀胱组织中无表达或弱表达；膀胱移行细胞癌中随肿瘤浸润深度和分级的增加，MK蛋白的表达逐步增强（P值分别为0.043、0.003）。而MK蛋白表达与性别、肿瘤大小、数目、初复治无相关（P值分别为0.466、0.229、0.837、0.785）。生存分析表明MK蛋白低表达组1、3、5年生存率分别81.8﹪、81.8﹪、72.7﹪，MK蛋白高表达组1、3、5年生存率分别63.6﹪、36.4﹪、18.2﹪，MK蛋白低表达组生存率显著低于高表达组，两组间生存率的差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论：MK蛋白在人膀胱移行细胞癌组织中高表达，在正常膀胱粘膜上皮无或弱表达。MK蛋白表达随肿瘤分期和分级的增加表达逐步增强，而与患者性别、年龄、肿瘤大小、数目、初复治无相关。MK蛋白表达与膀胱移行细胞癌术后患者的预后相关，MK蛋白呈高表达者的生存时间比低表达者短。因此MK有可能成为膀胱移行细胞癌有价值的分子标志物、预后分析指标及靶向治疗的靶点。3、洛伐他汀对人乳腺癌细胞的作用及相关机制的探讨目的：探讨洛伐他汀对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的作用及相关机制。 方法：选用人乳腺癌MDA-MB-231细胞进行体外培养，采用MTT比色法检测细胞增殖，测定其吸光度(OD)值。流式细胞仪测定细胞周期和凋亡率，光学显微镜和荧光显微镜进行形态学观察，流式细胞仪间接免疫荧光技术分析细胞内bcl-2蛋白、cdk2蛋白的表达。结果：不同浓度洛伐他汀处理不同时间后，MDA-MB-231细胞增殖明显受到抑制，抑制率最高可达77﹪，且同一处理时相点各组间比较差异均有显著性。洛伐他汀作用MDA-MB-231后，出现细胞凋亡峰和凋亡率的升高。细胞期分析显示：各组处理72小时G0/G1期细胞增多，S期细胞减少，G2/M期细胞增加，而且细胞周期分布特点与药物浓度有关。用流式细胞仪间接分析细胞内bcl-2、cdk2蛋白的表达率显示：洛伐他汀处理组bcl-2、cdk2蛋白表达低于对照组，差异有显著性。结论：洛伐他汀对人乳腺癌MDA-MB-231细胞有明显的抑制增殖和诱导凋亡作用，bcl-2蛋白、cdk2蛋白表达下降可能为其分子机制之一。二、与国内外同类技术比较及创新性、先进性1、131I-chTNT作为全球首个肺癌靶向治疗药物，其应用于肺癌患者已取得了较为理想的临床效果。但是肿瘤治疗是一个综合治疗的过程，手术、放疗、化疗、分子靶向治疗等手段如何合理的应用是肿瘤治疗的关键。随着近年放疗技术不断改进，三维适形放疗、调强放疗、图像引导放疗和Tomotherapy等技术的应用大大提高了放射治疗的有效率，放疗目前已经成为肺癌患者治疗的重要手段。但是该药联合外照射的研究国内外尚无报道，本课题研究外照射联合不同途径注射基因工程合成碘[131I]标记的肿瘤细胞核人鼠嵌合单抗（131I-chTNT）对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响并观察131I-chTNT在小鼠体内的分布和显像。为国内外首次报道，具有一定的创新性和先进性。2、膀胱癌是泌尿生殖系最常见的肿瘤之一，发病率高预后较差。目前临床采用传统治疗手段复发率较高，毒副作用较大，因此靶向治疗成为人们关注的治疗手段。其中治疗中靶点的选择是这一研究的关键。本课题采用SP免疫组化染色法研究中期因子（midkine，MK）在膀胱移行细胞癌组织中的表达，该研究结果在国内首次论证MK蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义，具有一定的先进性。目前后续实验正在研究以MK为启动子的条件复制病毒对泌尿系肿瘤细胞的作用，以期进一步论证该靶点的特异性和有效性。3、乳腺癌是威胁女性身心健康的严重疾病，居女性恶性肿瘤的首位，且近20年有逐年上升的趋势。雌激素受体阴性乳腺癌治疗一直是关注的重点。有研究发现细胞恶性转化的一个重要特征是调节胆固醇合成的胆固醇反馈机制的丢失，使细胞生长受抑，同时发生表型的改变。这为肿瘤的治疗提供了有益的借鉴。本实验采用分子生物学实验技术论证了洛伐他汀对雌激素受体阴性的乳腺癌细胞的生长抑制作用，从而为雌激素受体阴性的乳腺癌患者的治疗提供了新的思路，丰富了临床乳腺癌综合治疗的内容并提供了可靠的理论依据。三、作用意义、前景该项目研究内容紧密联系临床，就临床亟待解决的问题进行了基础研究以期为应用于临床提供理论基础，有较为广阔的临床应用前景，研究领域居国内领先水平。1、131I-chTNT作为全球首个肺癌靶向治疗药物，其应用于肺癌患者且已取得了较为理想的临床效果。放疗目前已经成为肺癌患者治疗的重要手段。但是该药联合外照射的研究国内外尚无报道，本实验从不同的治疗途径国内外首次论证了131I-chTNT联合外照射后对荷瘤小鼠的作用从而为临床开展综合治疗提供了理论依据，该研究结果具有一定的创新性和先进性。临床中经过严格的筛选和征求患者及家属的同意后可以进入临床试验观察疗效。2、膀胱癌靶向治疗中靶点的选择非常关键。通过检索国内外相关资料我们采用免疫组化手段国内首次论证MK蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义，为膀胱癌的靶向治疗的研究提供了理论基础。临床中我们还可以从体液中检测该指标与疾病分期、疗效的相关性，从基础和临床等多个方面来验证该指标的特异性。3、他汀类药物目前临床普遍应用治疗高脂血症和心血管疾病的防治。其还参与激素生成和转化的过程，临床中乳腺癌患者的发病与激素代谢水平紧密关联，因此洛伐他汀应用于乳腺癌患者的临床治疗有很好的前景，而且临床便于开展工作。