[01526250]新型抗Ⅱ型糖尿病纳米复合肽SeNPs-CTS-DBAYL的研制

糖尿病已成为现代疾病中的第二杀手,其对人体的危害仅次于癌症,而且目前的糖尿病患者有年轻化的倾向。患者中约90%为Ⅱ型糖尿病患者,近75%的患者在印度与中国等发展中国家,而且发病率在逐年上升,开发新型副作用低、成本低、疗效好的新型药物具有重要的社会意义和经济价值。本研究将为II型糖尿病治疗提供新的候选药物,并深入研究和揭示通过VPAC2受体介导,复合纳米肽DBAYL-SeNPs葡萄糖依赖性促胰岛素分泌、提高血糖代谢和利用及改善胰岛素敏感性等生物学效应及其分子机制,为申报临床批件和更深入的临床前及临床研究提供实验数据和实验基础。（1）利用基因工程技术实现了结构优化的、高稳定性VPAC2受体特异激动剂DBAYL的高效表达,制备的基因重组多肽DBAYL的纯度达到了98%,对制备的重组多肽DBAYL进行了质谱、高效液相色谱分析、分子量及多肽纯度测定等检测;（2）成功制备了可高效负载药物肽并具有良好缓释功能的壳聚糖修饰的纳米硒SC载体,通过共价偶联成功构建了新型纳米复合肽SeNPs-CTS-DBAYL（SCD）,建立和确定了纳米复合肽SCD的高效制备技术条件并制备了高纯度、粒径均一、高稳定性纳米复合肽SCD;对制备的纳米复合肽SCD的结构、组成、表征等进行了系列分析与鉴定,完成了相关药学研究;（3）利用分别稳定特异表达VPAC2、VPAC1及PAC1受体的CHO细胞系VPAC2-CHO、VPAC1-CHO、PAC1-CHO,完成了纳米复合肽SCD 对VPAC2受体的竞争性结合活性及特异激活性研究,测定了纳米复合肽SCD及其释放的多肽DBAYL竞争性替代[125I]PACAP38 与 VPAC2 受体的结合活性（半抑制浓度 IC50）,以及对VPAC2受体的半激活浓度（EC50）;（4）完成了纳米复合肽SCD对胰岛β细胞等细胞增殖和存活的影响以及确定了纳米复合肽SCD的安全有效剂量范围及其时效和量效关系,完成了纳米复合肽SCD促进胰岛β细胞增殖的生物学作用及分子机制研究;（5）完成了纳米复合肽SCD抗氧化应激损伤的生物学作用研究及其机制研究;（6）完成了纳米复合肽SCD促进胰岛β细胞增殖的生物学作用及分子机制研究;（7）完成了纳米复合肽 SCD 促胰岛 β 细胞胰岛素合成和分泌的生物学效应等研究;（8）完成了纳米复合SCD促进胰岛素与其受体结合的生物学效应等研究,揭示了纳米复合肽SCD对改善胰岛素敏感性的影响;（9）结合纳米复合肽SCD、活性多肽DBAYL、VPAC2受体特异拮抗剂PG99-465,完成了纳米复合肽SCD促进胰岛素及其受体介导的葡萄糖糖摄取和脂肪合成的生物学作用研究;（10）完成了纳米复合肽SCD对胰岛素受体介导的信号转导通路上关键信号分子和激酶表达与磷酸化水平的生物学效应及量效关系研究,以及纳米复合肽 SCD对胰岛素受体介导的信号转导最终效应物葡萄糖转运限速因子-葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）表达与细胞膜转位的生物学效应及量效关系研究;（11）完成了纳米复合肽SCD的体内相关药代动力学研究,明晰和确证了壳聚糖修饰的纳米硒在实验动物体内对重组多肽DBAYL药代动力学的改善作用及缓释效应;（12）利用正常和2型糖尿病模型动物,完成了纳米复合肽SCD每天给药一次、连续给药12周对实验动物血糖、糖化血红蛋白、血脂、葡萄糖耐量、体重、饮食量、饮水量、胰岛组织活性氧ROS水平、胰岛素分泌等生物学作用,完成了纳米复合肽SCD的体内初步毒理学研究。揭示和阐明了纳米复合肽 SCD在抗2型糖尿病中的生物学效应及其作用机制。