[01430634]重组抗人CD14单链抗体及其免疫毒素的研究

单抗靶向治疗白血病具有独到优势。自制抗人CD14新克隆ZCH-7-2F9单抗具有识别AML-M5a的作用。该项目采用基因工程方法对2F9单抗重链和轻链可变区基因（VH2F9和VL2F9）进行克隆、测序并研制单链抗体,对其功能进行初步研究,为临床靶向治疗白血病提供新的试验制剂。结果表明2F9鼠Ig重链和轻链可变区基因分别为360bp和321bp,分别编码120和107个氨基酸。采用重叠延伸拚接等方法构建2F9单链抗体（ScFv2F9）基因,并通过原核表达系统pIVEX2.3MCS/scFv2F9和分泌型真核表达系统pSectag2A/scFv2F9,分别在RTS500 E Coli HY和CHO细胞中表达,经SDS-PAGE电泳证实ScFv2F9蛋白质的分子量约为31kDa。阻滞试验表明,ScFv2F9蛋白能阻滞26.44%（原核）～90.02％（真核）的CD14-FITC与CD14抗原的结合,说明所克隆到的VH2F9和VL2F9基因是正确的,为进一步研制人源化抗体奠定了坚实的基础。