[01402707]抗肿瘤海洋生物新药JNY-1

从3种蚶属海洋中药（毛蚶Arca subcrenata Lischke、魁蚶Arca inflate Reeve和泥蚶Arca granosa L./ Tegillarca granosa L.）中分离得到数十种蛋白多肽类化合物,对其进行了结构表征及其抗肿瘤和抗氧化活性测试。 主要成果包括： （1）经匀浆、盐析、离子交换柱层析、凝胶柱层析等步骤从毛蚶中分离纯化得到JNY-1和JNY-2,经SDS-PAGE鉴定均为单一条带,在RP-HPLC上检测,其纯度均大于97%。测定其分子量分别为：16883.4Da和13189.7Da。经等电聚焦电泳鉴定均为单一条带,测定其等电点分别为5.3和 5.7。测定了JNY-1和JNY-2的紫外吸收图谱及各自的氨基酸含量,通过苯酚-硫酸法初步判定JNY-1中含有多糖部分。药理学实验表明：毛蚶总多肽具有体内抗肿瘤活性,对接种S180肿瘤小鼠的抑瘤率达到79.60 %;纯化产物JNY-1和JNY-2具有体外抗肿瘤活性,对Glc-82肺癌细胞JNY-1的IC50为23.33ug/ml;JNY-2的IC50为9.59ug/ml。 （2）从毛蚶中得到抗肿瘤候选药物P2,该组分具有高效、低毒等特征;作用机制研究结果表明：P2系通过上调ROS水平、诱导HeLa和HT-29细胞凋亡、促进细胞周期G2/M期阻滞等发挥其抗肿瘤作用。 （3）从P2中分离得到新多肽化合物H3,其纯度为99.3%,分子量为20491.0 Da,等电点为6.65。质谱测定结果显示其由117个氨基酸序列组成。体外抗肿瘤活性测试结果显示,H3毒性低、稳定性好、抗肿瘤活性强（对HeLa、HepG2和HT-29细胞的IC50值分别是10.8 μg/ml、10.1 μg/ml和10.5 μg/ml）;对DPPH和羟基自由基清除率分别为56.8%和47.5%。此外,尚从P2中纯化得到另外一种糖肽H2a,其纯度为97.3%,分子量为35893.0 Da,等电点为7.50。体外抗肿瘤活性测试结果显示,H2a毒性低、稳定性好,对HeLa的IC50值为136.5 ?g/ml,对HepG2和 HT-29肿瘤细胞也有一定的抑制作用;对DPPH和OH自由基的清除率分别为69.2%和58.5%。 （4）从海洋生物魁蚶中性蛋白酶水解物中分离得到一个新多肽化合物N3-G2,纯度达99.0%以上,分子量为17578.310Da,等电点为5.78;CD谱分析其二级结构组成N3-G2含有40.8% α-螺旋、24.7% β-折叠、15.9% β-转角和18.6%无规卷曲;具有较好的体内外抗氧化活性,并具有延缓秀丽隐杆线虫衰老的作用。 （5）从泥蚶中分离得到新蛋白D2-3,其分子量为20.320 kDa,纯度为99.0%,等电点为4.70。MTT法测得D2-3对HT-29肿瘤细胞的IC50值为25.42 μg/mL。D2-3的氨基酸序列为LMMTDVEESR/KNGRNVDISHKDKG。此外,尚分离得到另一蛋白组分D2-2S1,其分子量为41.092 kDa,纯度为99.5%,等电点为4.30,体外抗肿瘤测试结果显示其对HT-29细胞的IC50 值为253.39 μg/mL。 20多年来,本课题组已申请/获批相关发明专利5项,包括国际专利1项。发表相关论文13篇,其中SCI文章7篇（包括A1文章6篇,A2文章1篇）;获批国家“重大新药创制”科技重大专项1项、国家自然科学基金1项、广东省科技重大专项2项、广州市科技重点项目1项,获批经费460万元;此外,尚有3项与其直接相关的新药研究正在进行中。