[01256199]弓形虫复合多价分子疫苗的制备及应用研究

一、课题来源与背景：2004年广西科技厅桂科计字[2004]43号文件下达的广西科学研究与技术开发计划项目“弓形虫复合多价分子疫苗的制备和应用研究”（合同编号：桂科合0443004-36）。

二、研究目的与意义：弓形虫是最重要的人兽共患寄生虫病之一，至今尚未找到理想的防治药物，使用有效的疫苗是防治弓形虫病的最理想办法。并已研制出全虫疫苗、虫体特异组分疫苗、分子疫苗和核酸疫苗等多种疫苗，试验表明，全虫死疫苗和虫体特异组分疫苗保护效果差，减毒活疫苗存在虫株遗传性质不稳定，对人畜不安全，无法有效应用，因此，寄希望于分子疫苗和核酸疫苗身上。由于弓形虫生活史阶段多，抗原成分复杂，单一亚单位疫苗难以发挥有效作用。本项目研究构建弓形虫基因组表达系统，获得具有应用前景的重组分子疫苗，为弓形虫病的防治提供了新的思路和方法;建立分子生物学技术研究平台，可为病原学科本科生和硕士生的教学和科研服务。

三、主要论点与论据：1、应用领域：重要疾病防治。

2、技术原理：本项目应用基因克隆技术，体外扩增P30、P22和P18抗原基因，构建弓形虫抗原基因质粒重组表达系统并在体外高效、稳定表达，应用生物信息学方法，分析表达产物的结构、性质和功能，进行亚单位疫苗组合应用研究，制备高效复合分子疫苗。

3、考核指标：（1）体外PCR扩增获得弓形虫搞原基因P30、P22和P18相对应的抗原基因SAG1、SAG3和SAG4片段，并进行了分析和鉴定;（2）建立弓形虫P30、P22和P18抗原基因高效、稳定的重组表达系统。（3）获得弓形虫P30、P22和P18抗原基因表达产物，并进行了初步生物学性质分析和功能研究，明确了表达产物的结构、性质和功能;（4）制备弓形虫复合多价疫苗，经动物保护性试验证实，多价疫苗具有较好的免疫保护作用。

四、创见与创新：（1）国内外对弓形虫P30和P22蛋白基因研究较多，本项目首先在国内开展P18搞原基因的研究，并且成功体外PCR扩增获得SAG4基因片段，并应用生物信息学方法进行结构与功能研究。

成功构建了弓形虫抗原基因SAG1、SAG3和SAG4重组体，探索制备复合多价分子疫苗，弥补单价疫苗的不足，增强免疫效果，为弓形虫病的防治提供了新的思路和方法，研究处于国内领先水平。

五、社会经济效益，存在的问题：国内外弓形虫基因疫苗研制，仍以单价亚基因分子疫苗研究为主。本研究应用分子克隆技术，构建多个弓形虫基因重组系统，研制复合分子疫苗，免疫水平要高于单价亚基因分子疫苗，研究技术处于国际疫苗研究前沿。

本项目研究构建弓形虫基因组表达系统，获得具有应用前景的重组分子疫苗，为弓形虫病的防治提供了新的思路和方法，建立分子生物学技术研究平台，已完成科研论文5篇，培养硕士研究生3名，显现较好的社会效益。

疫苗应推广应用畜牧业、高危人群弓形虫病预防保护性接种，尚需进一步明确免疫效果，进行免疫途径和方法等增效策略方面的研究，完成临床应用前期安全性测试。