[01227273]检测猪呼吸道疾病综合征病毒性病原PCR方法的建立及临床应用

本课题为自选项目,属于畜牧兽医学科兽医学领域的研究内容。 猪呼吸道疾病综合征（Porcine respiratory disease complex,PRDC）是由多因素（病原体感染、饲养管理和环境因素等）引起的呼吸道疾病总称,主要表现为生长缓慢、饲料报酬降低、嗜睡、食欲减退、发热、咳嗽、呼吸困难,给世界养猪业造成巨大经济损失。美国国家动物健康监测系统（National Animal Health Monitoring System,NAHMS）1995年资料显示呼吸道疾病是保育猪和生长育肥猪死亡的首要原因。 虽然PRDC是由多因素引起,但通常认为非感染性因素（饲养管理和环境因素）是呼吸道疾病发生的重要促发因素（或通过增进病原体的传播和蔓延,或创造恶劣环境增加动物应激或增加呼吸道损伤）,原发性病原体[猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）、猪流感病毒（swine influenza virus,SIV）、伪狂犬病病毒（pseudorabies virus,PRV）和猪圆环病毒2型（porcine circovirus type 2,PCV2） 及猪肺炎支原体 、支气管败血性波氏杆菌 和 传染性胸膜肺炎放线杆菌]和继发性病原体（多杀性巴氏杆菌、副猪嗜血杆菌 、猪链球菌等）的感染是PRDC的根源。在PRDC病例中,原发病毒性病原体（PRRSV、SIV、PCV2和PRV）的多重感染更加常见,并且它们多数都能破坏宿主的免疫系统,更易引起继发感染,加重病情,因此,控制引起呼吸道疾病的病毒性病原体显得尤为重要,而快速诊断是监测、预防和治疗的前提。 PCR是检测临床样品中病原体的快速、敏感和特异性分子生物学方法,特别是多重PCR可同时检测样品中的多个病原体,在检测引起PRDC病毒性病原体时优势更加明显,因此本研究旨在建立检测PRRSV、SIV、PCV2和PRV的单项和多重PCR,快速检测引起PRDC的病毒性病原体,为PRDC的监测、预防和治疗奠定基础。 创新点如下： 1、本研究建立了分别检测PRRSV、SIV、PCV2和PRV的单项（RT-）PCR方法,具有较好的特异性,较高的敏感性,并能用于临床样品检测。 2、本研究建立了同时检测猪呼吸道疾病综合征常见病毒性PRRSV、SIV、PCV2和PRV的多重PCR方法,特异性强,敏感性如下,PRRSV最低检出量为 1.5 pg,SIV最低检出量为 7.2 pg,PCV2最低检出量为 4.3pg,PRV最低检出量为2.7pg,重复性好,为该病的快速诊断和流行病学监测提供了有效手段。 3、本研究利用所建立的多重PCR诊断方法,对河南省猪场PRDC的发病情况进行了调查,结果发现河南省猪场PRDC病料中PRRSV、SIV、PCV2和PRV的检出率达93.4%,混合感染较为普遍,达72.5%,其中PRRSV和 PCV2的混合感染最为严重,达33.4%。为PRDC主要病毒性病原流行病学研究提供了宝贵资料。