[01226635]基于fima适配子的鱼类迟缓爱德华菌病防控技术研究与示范

①课题来源与背景 课题来源为省级投入,经费实际投入额为15万元。 迟缓爱德华氏菌是近些年严重危害全球水产养殖业的一种病原。虽然已有迟缓爱德华氏菌的部分疫苗问世,但其免疫效果依然不尽如人意,目前该病的防治依然以药物为主。然而,在实际生产上,抗生素的使用已经导致鱼类的生理障碍及药物残留、水体污染、水中有益菌群失调等一系列问题,甚至还出现了大量迟缓爱德华氏菌的耐药菌株。因此,亟待开发针对该菌的新型渔药和疫苗。 近年来,在实际生产中,针对二硫氰基甲烷应用于水产动物疾病防治进行了一些尝试,得到了一些有益的结果。同为抑菌剂,双乙酸钠和苦参素则未见有应用于水产养殖业的报道,此外,该项目未执行前缺乏能够反映上述3种药物对迟缓爱德华氏菌的体外药效学的数据支撑。 ②研究目的与意义 该项目针对上述问题,开展了二硫氰基甲烷、双乙酸钠和苦参素对迟缓爱德华氏菌的体外抑菌效果研究,克隆并表达了迟缓爱德华氏菌的磷酸盐ABC转运体底物结合蛋白基因,为该菌引发的水产动物疾病的防治提供参考。 该研究成果可为二硫氰基甲烷、双乙酸钠和苦参素在水产养殖业的大规模应用提供理论支撑,也为迟缓爱德华氏菌引发的水产疾病的防治提供一种新的策略。 ③主要论点与论据 1) 随着血清含量的升高,二硫氰基甲烷和双乙酸钠对迟缓爱德华氏菌的MIC和MBC均逐渐增大。不同的细菌接种量和培养温度都影响二硫氰基甲烷和双乙酸钠的抑菌能力。要有效抑制迟缓爱德华氏菌,需在该菌的对数生长期之前加入二硫氰基甲烷或双乙酸钠。杀菌动力学曲线显示,呈现随二硫氰基甲烷或双乙酸钠浓度的增加,杀菌效果增强的浓度依赖性规律。PAE值越大,细菌生长恢复的速度越慢。 2) 苦参素能导致迟缓爱德华氏菌胞外AKP酶活力升高,引发核酸和蛋白质渗漏,提示苦参素能破坏该菌的细胞膜和细胞壁。此外,苦参素还能抑制该菌蛋白质和DNA的合成。 3) 克隆了迟缓爱德华氏菌的磷酸盐ABC转运体底物结合蛋白基因,并将该基因定向连接到pET-28a（+）表达载体并转化至E.coli BL21（DE3）得以表达。 ④创见与创新 该成果首次研究了二硫氰基甲烷、双乙酸钠对迟缓爱德华氏菌的体外药效,以及苦参素对该菌的抑菌性能和抑菌作用机制。 ⑤社会经济效益,存在的问题 二硫氰基甲烷、双乙酸钠、苦参素属于低毒、低残留物质,将其应用于水产养殖业中迟缓爱德华氏菌病的防治,是一个新的思路和尝试。另外,二硫氰基甲烷、双乙酸钠杀菌能力强且价格低廉,对养殖水体的水质影响很小,符合生态与环保的要求,也可降低养殖成本。 该研究成果具有潜在的应用价值,可为迟缓爱德华氏菌引发的水产动物疾病的防治提供参考,具有潜在的社会经济效益。