[01164418]北部湾海洋生物中靶向Src新型抗肿瘤药物先导的识别及结构优化

恶性肿瘤是导致人类死亡的主要原因之一,每年造成700多万人死亡（约占死亡人数的13%）,随着世界人口日趋老龄化,预计全世界癌症死亡人数将继续上升,到2013年可能超过1310万,而广西在近几年中癌症发病率在逐年上升,肝癌、鼻咽癌死亡率高于全国水平。经过多年的发展,抗肿瘤药物的研发虽然取得了许多重要进展,然而面对威胁人类生命健康最严重的实体瘤至今仍然缺乏高效、特异性强的药物,因此,抗肿瘤药物的研发任重而道远。从天然产物中得到先导化合物是发现和创制新药的一条重要途径,大约48.6%的药物直接来源于天然产物,超过74.8%的药物直接或间接源于天然产物,例如从陆生中草药中获得了许多极具应用价值的新型药物如紫杉醇等或其他药物先导如鬼臼毒素等。海洋生物的多样性远高于陆地,地球物种80%生长在海洋中,丰富的生物多样性等于丰富的化学结构多样性,海洋将可能逐步成为先导化合物发掘的主战场,特别是在海洋抗肿瘤药物的研究上, 基于美国NIH的报告,约有10%的海洋生物提取物有抗肿瘤效用,而陆地的只有1%。本项目以北部湾海洋生物如海星、软珊瑚、海绵等海洋生物为研究对象,运用传统色谱方法得到富含成分的分离提取物,对常量组分进行分离表征及活性筛选同时对具有较好抗肿瘤活性的化合物进行化学提取、结构表征及优化。 1)北部湾涠洲岛海域中海星的活性追踪研究：首先,将已打碎的海星用75% 乙醇溶液浸泡后,将其浸出液过滤,减压浓缩得浸膏,用适量超纯水溶解制成悬浮液,依次按照石油醚（PE）、乙酸乙酯（EA）、正丁醇萃取,得到海星石油醚（PE）相提取物（X-1）、乙酸乙酯（EA）相提取物（X-2）、正丁醇相提取物（X-3）和水相提取物（X-4）。采用琼脂扩散法对其进行抗菌活性测试,测试结果表明海星乙酸乙酯相对铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）、金黄色葡萄球菌（staphylococcus aureus）有良好的抑菌活性,正丁醇相对铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）也有一定的抑菌活性。采用MTT法进行体外抗肿瘤活性测试,结果表明：海星乙酸乙酯（EA）相对各种测试细胞有一定的抑制活性,但它对正常细胞也有一定的毒害作用。 表1海星不同极性提取物的抑菌活性对比（抑菌圈直径：mm） Table1 the anti-bacterial activity contradistinction of different starfish polar extracts （the diameter of inhibitory zone: mm） 菌种 样品 X-1 X-2 对照组 X-3 X-4 对照组铜绿假单胞菌 13 14.5 12 15 14 13 金黄色葡萄球菌 12 13 11 11.4 11.6 11 肺炎克雷伯氏菌 12.3 13 12 12 11.5 12 大肠埃希氏菌 13.5 12.5 12 11.5 11.5 11 普通变形杆菌 14 13.5 13 15.5 16 15 从表2中可以看出,海星乙酸乙酯相对铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌有良好的抑菌活性,正丁醇相对铜绿假单胞菌也有一定的抑菌活性。总体来说,海星乙酸乙酯相和正丁醇相得抑菌活性优于石油醚相和水相。 2) 北部湾涠洲岛海域中海绵的活性追踪研究：采用与海绵同样的方法对海绵进行处理,得到海绵石油醚（PE）相提取物（M-1）、乙酸乙酯（EA）相提取物（M-2）、正丁醇相提取物（M-3）和水相提取物（M-4）,对其进行生物活性测试,结果表明：海绵各相对铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）都有良好的抑菌活性,且石油醚（PE）相对金黄色葡萄球菌（staphylococcus aureus）也有一定的抑菌活性,海绵乙酸乙酯（EA）相对CNE-2细胞有一定的抑制作用,且对正常细胞毒害作用较小。表2海绵不同极性提取物的抑菌活性对比（抑菌圈直径：mm） Table 2 the anti-bacterial activity contradistinction of different sponge polar extracts （the diameter of inhibitory zone: mm） 菌种 样品 M-1 M-2 对照组 M-3 M-4 对照组铜绿假单胞菌 18 17 14 16 17 12 金黄色葡萄球菌 16 13 12 11.5 12 11 肺炎克雷伯氏菌 12 12 11 11.5 12 11 大肠埃希氏菌 11.5 12 11 11.5 12 11 普通变形杆菌 12 12 11 11 11 10 从表2的结果可以明显看到,海绵各相对铜绿假单胞菌都有良好的抑菌活性,且石油醚相对金黄色葡萄球菌也有一定的抑菌活性。 项目测定了海星及海绵不同相粗提物的抗菌及抗肿瘤活性,得到具有较好生理活性相。通过不同相粗提物的活性跟踪分离出单体化合物。研究共分离得到17个化合物,其中,海星石油醚（PE）相分离得到10个化合物,海星乙酸乙酯（EA）相分离得到5个化合物,海星正丁醇相分离得到1个化合物,海绵乙酸乙酯（EA）相分离得到1个化合物。已鉴定的化合物有8个,并对单体化合物进行了体外抗肿瘤活性研究