[01157106]印迹整体柱的制备及在DNA氧化损伤标记物检测中的应用

本项目依据河南省科技厅基础与前沿研究计划项目立项通知书中“印迹整体柱用于DNA氧化损伤标记物的萃取分析”项目（项目编号：122300410346）开展研究。 项目以鸟苷作为模板分子,制备了用于管内固相微萃取的分子印迹整体柱。利用制备出的分子印迹整体柱作萃取介质,结合HPLC/UV分析装置,建立了分子印迹管内固相微萃取—液相色谱/紫外检测8-OHdG的方法,实现对健康人和癌症病人等尿样中8-OHdG含量水平的分析检测。项目具有以下技术特征。 1.分子印迹整体柱的制备：鸟苷（替代模板分子）17.5mg,丙烯酰胺56mg,4-乙烯基吡啶64mg（功能单体）,N,N`-亚甲基双丙烯酰胺63mg（交联剂）,二甲亚砜（DMSO）350mg（溶剂）和十二醇280mg（致孔剂）。上述试剂经混合,灌装,恒温60℃反应18小时,尔后冲洗模板制得分子印迹整体柱。 2.制备的分子印迹整体柱对鸟苷和8-OHdG均表现出较好的富集能力,鸟苷和8-OHdG的富集因子分别是：100.1和75.6。 3.考察了分子印迹整体柱的选择性：鸟苷和8-OHdG在印迹柱的萃取量与非印迹柱萃取量之比分别为2.2和2.0,分子印迹贡献率分别为54%和48%,即印迹对提高萃取效率和选择性有明显贡献。 4.不同批次制备的印迹整体柱,萃取效果的相对标准偏差（RSD）为：3.8%（n=5）。每支印迹柱离线萃取的次数可以达到40次以上。 5.建立了分子印迹管内固相微萃取—液相色谱/紫外检测8-OHdG的方法,方法的线性范围为：0.01μmol/L～5.3μmol/L,相关系数为：0.9997（n=7）,最低检测限为3.2nmol/L,最低定量限为11nmol/L。