[01145586]甘草次酸抗心律失常的研究与开发

一、项目来源：该项目为大连市科技局科技计划项目，项目编号为2002B4NS048，2002年申请并列入计划。二、应用领域和技术原理：该项目研究的药物可广泛应用于国内外医疗卫生部门。采用经典的抗心律失常实验方法进行动物器官水平的研究。采用膜片钳技术，全细胞记录法，进行动物心肌细胞分子水平的研究。三、性能指标（一）甘草次酸抗心律失常作用的研究（器官水平的研究）1． Gta抗乌头碱诱发大鼠心律失常用乌头碱致大鼠心律失常，10min后分别舌i.v NS、Gta、Quin。给Gta与Quin后的大鼠，心律失常持续时间显著低于给盐水(NS)组， P2. Gta抗BaCl2诱发大鼠心律失常 用BaCl2致大鼠心律失常，给Gta和Quin后的大鼠心律失常持续时间显著低于给NS组，P3. Gta抗CaCl2-Ach混合液诱发小鼠心房纤颤或扑动用CaCl2-Ach混合液诱发小鼠心房纤颤或扑动，给NS组全部发生心房纤颤或心房扑动，而给Gta和Quin组，前者无一例发生，后者明显降低与NS组，P4. Gta抗结扎大鼠左冠状动脉前降支诱发早期心律失常结扎大鼠左冠状动脉前降支诱发早期心律失常，记录Ⅱ导ECG，统计30min内NS、Gta和Quin组的室性异博数，室速时程及室颤出现％和心律失常时间。Gta和Quin组与NS组比较P5. Gta影响麻醉大鼠心电图舌i.v Gta10mg.kg-1后，分别观察1,3,5,7.5,10min（rate/min、P-R间期（ms）和Q-T间期（ms）），给药前后比较P（二）甘草次酸抗心律失常作用机理的研究（分子水平的研究）1． Gta抑制Ica-L内流记录ICa-L时，保持电位一30 mV, 指令电位0mV时，可记录到ICa-L，即峰值ICa-L , 对照组为(2.30士0.29nA);当间隔一定的时间在浴槽内加入0.1、1、10μmol.L-1 Gta时，所记录的Ica-L 与对照组比较，分别减小到（1.96士0.34） nA ,n＝5、（1.37士0.24） nA,（0.66士0.20） nA, 明显抑制ICa-L的内流。2. Gta使电流-电压（I-V）曲线显著上向正电位方向移动[5-6] 保持电位(holding potential,HP)-30 mV,指令电位（CP)-40～+60 mV，步阶脉冲10 mV、时程300 ms、刺激频率0.5 Hz引出钙电流。Gta 0.1，1，10 μmol/L细胞外液依次灌流5 min，测得电流-电压(I-V)关系曲线，I-V曲线显著上向正电位方向移动。灌注前后及药物不同浓度组之间ICa-max均具显著性差异(P＜0.05 、P＜0.01，P＜0.001。 3. Gta抑制Ica具有明显的剂量依赖性在指令电位0mV时，0.1μmol.L-1 Gta对Ica已有明显的抑制，使Ica减小15％（P＜0.05，n＝5），1μmol.L-1Gta降低Ica 40％（P （三）甘草次酸的毒理学研究根据改进寇氏法，将粗略获得的动物最大不致死量（LD0）及最小致死量（LD100）的剂量范围，按等比级数分为6组，从而根据各组动物死亡的比率来计算半数致死量（LD50）。急性毒理学测定结果为 407mg/kg，证明了Gta的低毒性。（四） 甘草次酸的药物制剂将甘草制得甘草酸，进一步分离提取乳白色甘草次酸粉末。含量达99％。取甘草次酸的乳白色粉末加水至每2毫升含甘草次酸10毫克，用5 ％碳酸钠调节pH为7，煮沸放冷过滤，添加注射用水至全量，过滤，灌装熔封，1000C 30分钟灭菌，灯检，包装备用。综上所述该项目达到了预期技术指标：1．甘草次酸具有广泛的抗心律失常作用；2. 甘草次酸通过阻断钙通道而产生抗心律失常作用；3．甘草次酸毒性低。应用前景：在世界范围内心脏病的发病率急剧上升，占世界发病率首位[1]。其心肌肥厚、心肌缺血、心肌梗死及心力衰竭等可诱发严重的恶性心律失常,以致心脏猝死[2]，极大的威胁着人类生命。目前虽然应用了一些化学合成的抗心律失常药物治疗此病，收到一些效果，但其毒副作用（致心律失常作用）却严重制约着此病的治疗，使病情恶化。通过实验研究我们发现甘草次酸具有高效、低毒的抗心律失常作用。1．社会意义 ① 完善甘草及其活性成分的抗心律失常作用与作用机理，填补国内外这一作用的空白，推动科技事业的不断发展。 ② 解决占世界首位心血管疾病引发的心律失常带给人们的痛苦和对生命的威胁，以保证人类身体健康。2．经济效益 目前抗心律失常药基本由化学合成品充斥市场，这些药物虽可缓解心律失常，但由于其副作用较大，人们常因耐受不了，而终止用药，构成了对生命的威胁。人们期望高效低毒抗心律失常药物的问世。至今国内外并未报道甘草次酸抗心律失常作用和作用机理的研究成果，更无人开发这一药品市场。我们现在研究的甘草次酸，通过实验证明其具有同西药同样的抗心律失常作用，但却不具有毒副作用，人们将更加青睐这类药物的选择。这一研究成果一经开发，无论工业增加值、销售收入、净利率、创汇额在国内外药品市场必定占领较大的竞争优势，其经济效益不可估量。