[01137008]动物源性食品常见病原菌快速检测技术的研究

1、课题来源与背景; 项目来源于桂科计字[2008] 16号文件下达的广西科学研究与技术开发计划项目“区域环境保护与可持续发展研究与示范”所属课题“动物源性食品常见病原菌快速检测技术的研究”,任务书编号：桂科项0816004-1-11,项目合同编号：桂科项0816004-1。项目起止时间2008年1月至2010年12月,项目经费8万元。食品安全是全世界共同关注的公共卫生问题,而动物源性病原菌污染食品引起的食源性疾病危害最大,引起的范围更加广泛,并且很多的动物源性病原菌均是人兽共患病病原菌。我国虽然已经制定了相应的食源性致病菌的标准检验方法,能够正确,有效的检测出致病菌,但耗时较长,工作量大,且一次只能检测一种病原菌,很难适应新鲜食品快速流通的节奏。 2、技术原理及性能指标 可快速鉴别诊断大肠杆菌、沙门氏菌、弯曲杆菌及单核细胞增多症李氏杆菌四重PCR技术,关键是设计的引物所扩增的目的基因产物大小在电泳时有差别,其次是各引物的比例恰当,保证4个目的产物能均衡扩增。通过对PCR反应参数和条件的优化等研究,获得一种快速、敏感、准确、高效的检测技术,建立一种可快速（6个小时内）、敏感（几个-几十个病菌细胞）、特异（与其它病原无交叉反应）的实用方法,为食品安全监测提供技术支持。 3、技术的创造性与先进性; 成功建立四种病原菌沙门氏菌、单核细胞增生李斯特菌、大肠杆菌O157：H7、空肠弯曲杆菌)的多重PCR检测方法。该方法能在一个工作日（8h）内完成4种病原菌鉴别诊断工作,研究同时还建立了同时检测两种或者三种的二重或三重PCR检测技术。这些检测方法不仅具有快速、敏感、特异的特定,而且一次PCR反应就能够同时检测动物源性食品中包含的四种病原菌,解决了传统经典方法耗时耗力的缺点。这个方法的建立为食源性病原菌的检测提供了先进实用的分子生物学诊断新技术,填补国内外这一研究领域的空白。 4、技术的成熟程度,适用范围和安全性; 成功建立四种病原菌的多重PCR检测方法。该方法能在一个工作日（8h）内完成四种病原菌的检测工作,这些技术在动物源性病原菌检测上具有特异、灵敏、快速的优点,可在8小时内对病原菌进行检测,克服了传统方法耗时耗力等缺点。通过对临床采样进行检测,证实PCR、多重PCR与传统分离鉴定方法的符合率为100%,而且PCR技术对临床样品的敏感性更高、更方便快速。不含任何有毒、有害物质,使用安全。 5、应用情况及存在的问题; 应用情况：该研究建立了以分子病原学分析为前提,PCR快速检测为手段,在实际生产上推广应用,产生了明显工作效率。该成果的成功应用也为其他疾病的分子病原学研究及疾病防制提供示范作用。 存在的问题和改进意见：基层单位均缺乏相应的仪器设备、工作人员对这些先进诊断技术了解不多,大多数基层工作者的观念没有转变。基层单位也缺少掌握基因诊断技术的技术人员和实验装备,因此要在食品检测中广泛推广应用这些技术,需要政府部门的投入、工作人员的技术培训、高技能工作人员的引进等。 6、历年获奖情况; 无