[01008320]高密度培养生产高活力a-乙酰乳酸脱羧酶
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技术详细介绍
该项目采用现代化生物技术手段重组DNA，经高密度培养生产a-乙酰乳酸脱羧酶，经菌种筛选和反复多次的PCR测试，项目组从一株克雷伯氏土壤菌中克隆到编码a-乙酰乳酸脱羧酶的基因(约900bp片段)，经过周密细致的基因操作，将该基因以正确读码框形式连接到表达质粒pET5a上，在强启动子T7的存在和细胞高密度培养两者结合的情况下，该基因得以在大肠杆菌TG1中高水平表达。该项目研究的摇瓶表达量为：最高达1080U/ml，平均600-700/ml，是丹麦Novo公司公布文献所记载的7-10倍，国家“八五”攻关课题目标指标的100-120倍；该项目3吨和5吨发酵罐的表达量稳定在600U/ml，重现性较好的是600U/ml左右，这也比丹麦Novo公司高4倍以上，比国家“八五”攻关课题指标高50倍，已完全具备大生产条件。产品经多个厂家试用，效果完全达到或稍高于Novo公司产品的技术指标。